人T淋巴细胞白血病细胞（Jurkat）培养要点

　　人白血病T淋巴细胞Jurkat，CloneE61由Schneider建立，来源于一个14岁的男孩的外周血。该克隆是JurkatFHCRC细胞株的一个克隆（Jurkat的一个衍生株），经佛波酯（phorbolesters）和外源凝集素（lectins）或抗T3单克隆抗体（需要两种物质共同诱导）诱导后可产生大量IL2。
　　Jurkat细胞是一种悬浮细胞，是用于研究急性T细胞白血病，T细胞信号传导以及易感病毒进入的各种趋化因子受体，特别是HIV的表达的永生化人T淋巴细胞系。它在生物学研究上具有十分广泛的应用，比如应用Jurkat细胞研究核糖核酸酶P的M1RNA，探讨抗MHC类分子转录激活因子（CTA）的M1RNA抑制细胞表面MHC类分子的表达。
　　Jurkat细胞培养注意要点
　　Jurkat细胞为悬浮生长，理想的状态是均匀的成团生长；
　　Jurkat细胞有密度依赖性，细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在48105mL为宜；超过1。0106mL则需要传代。
　　Jurkat细胞对机械力较敏感。正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使细胞分化和死细胞增加。
　　血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
　　如生长过程中观察到细胞团中心发黑，代表细胞团过大，这个时候可以轻柔的吹散较大的细胞团，但是不用强行吹散成单个细胞。
　　Jurkat细胞换液
　　补液法：培养基变黄时可补加适量（12mL）新鲜培养基，补加12次之后，用离心的方式全部换液，离心1200rpm（约250g）3分钟。
　　半换液法：以T25瓶子为例，瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间，待细胞沉底，小心吸出2。5mL的培养基，转移到离心管，离心1200rpm（约250g）3分钟，检查有没有沉淀，以免损失细胞；原瓶补充2。5mL新鲜培养基，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶。
　　如果换液后第二天培养基就变得很黄，同时镜下检查未污染，说明细胞密度大，应该传代。
　　Jurkat细胞传代
　　摇晃培养瓶，把细胞摇匀，均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量培养基。
　　离心法：离心后计数，按照4050万细胞mL的密度接种到T25瓶里，瓶中培养基量以5mL为宜。不方便计数时，按1：2比例传代。
　　死细胞或细胞碎片较多的情况下，建议用离心法传代，离心转速可适当降低（推荐8001000rpm或160200g）。
　　Jurkat细胞冻存
　　由于Jurkat是悬浮细胞，更易受到冻存影响，建议加大冻存密度，大约200万300万mL为宜，以提高复苏存活率。
　　Jurkat细胞对冻存温度比较敏感，建议冻存后立即转入80冰箱，长期保存应放在液氮罐中。
　　经测试，Jurkat使用非程序降温冻存液的复苏存活率高于程序降温冻存液，推荐使用HyCyte一步冻存液（GUCPR201）。
　　Jurkat细胞复苏
　　Jurkat细胞复苏后通常需要35天恢复状态，建议复苏后48小时内不要进行操作。
　　作者：海星生物
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